黄曲霉毒素分析方法汇总

一、多功能净化柱＋KRC光化学柱后衍生法

1 简介

多功能净化柱是由多种固相复合填料不仅包括大分子物质，更重要的是含有多种活性亲脂性（非极性）和带电（极性）物质，用来吸附各种酯类，叶黄素，化学物质，碳水化合物和蛋白质等干扰物。多功能净化柱＋KRC衍生法就是利用PRIBOLAB公司的Pribofast 226/260多功能净化柱可以将AFT B1、B2、G1、G2很好的分离出来，然后用HPLC/FLD＋KRC柱后衍生系统可以有效的测定AFT B1、B2、G1、G2含量。

2 多功能净化柱特点：

2.1 多功能净化柱可以简化样品提取、净化步骤，无需清洗和洗提。

2.2 可以实现多种毒素检测，有效降低检测成本；

2.3 HPLC＋FLD+KRC衍生化，可以有效提高检测灵敏度，实现较低的检测限(AFT B1 0.05ppb)；
2.4 光化学衍生操作简便，无需使用衍生试剂（通常电化学柱后衍生均需要使用衍生试剂，分析成本高，操作麻烦，仪器故障率较高）；
2.5 一步法净化，回收率高达90％左右。

2.6 广泛适用于各类农产品：谷物、淀粉、动物饲料、食品、坚果、棉籽等。

3 多功能净化柱/KRC衍生法操作步骤简介：

3.1 提取样品：研磨粉碎、称重25g样品；用乙腈/水（84/16 V/V）混合样品，

高速均质 1 分钟。
3.2 过滤：将提取的样品定量滤纸过滤，收集滤液；

3.3 取4－6ml滤液快速通过 多功能净化柱PribofastM226 或Pribofast M260

3.4 收集过柱溶液，直接用于HPLC检测，KRC衍生化后直接记录AFT浓度。

二、免疫亲和柱＋KRC光化学柱后衍生法

1 简介

Pribofast AFT总量免疫亲和柱可选择性吸附样品液中的毒素，从而对毒素样品起到非常针对性的纯化作用，然后用HPLC/FLD＋KRC柱后衍生系统可以有效的测定AFT B1、B2、G1、G2浓度，提高检测的准确性和灵敏度。

2 免疫亲和柱/KRC衍生法特点：

2.1 特异性很强使得样品净化效果；

2.2 使用免疫亲和柱操作架可以使样品净化快速，提高检测效率高
2.3 HPLC＋FLD+KRC柱后衍生化，有效提高检测灵敏度，实现较低的检测限 (AFT B1 0.05ppb)。
2.4 衍生化操作方便，光化学衍生化无需使用衍生试剂（通常电化学柱后衍生均需要使用衍生试剂，分析成本高，操作麻烦，仪器故障率较高）。

2.5 回收率高，达到90％以上

3 免疫亲和柱法操作步骤简介：

3.1 提取样品：研磨、称重50g样品；用甲醇/水（80/20 V/V）混合物将样品

高速混匀 1 分钟。
3.2 过滤：将提取的样品滤膜过 玻璃纤维滤纸，
3.3 将回温的免疫亲和柱安装在泵流操作架进行过柱净化：经过Pribofast AFT总量免疫亲和柱（IAC-010-3）活化、淋洗、洗脱三步骤，洗脱下来的溶液可直接用于HPLC检测；

3.4 测定：HPLC直接进样，经色谱柱、KRC光化学柱后衍生化后直接记录AFT浓度；

三、酶联免疫法检测AFT总量

1 采取直接竞争ELISA方法，利用酶标仪测定样品和标准品的样本的吸光值计算得到样品中AFT总量的含量。

2 试剂盒检测时间：15分钟＋15分钟

3 检测限：0.1ppb

4 交叉反应率：

关于Pribofast KRC 柱后衍生器和 HPLC参数

●Pribofast KRC 柱后光化学衍生器 波长：254 nm
●HPLC-色谱柱： AFT色谱柱150 x 4.6 mm; C-18
●流动相: 甲醇/水  (45/ 55  v / v)
●流量：1.0 mL/min   柱温： 30 °C
●进样体积：20μL
●荧光检测器：λ-激发波长：365 nm    λ-发射波长：440 nm

●液相色谱仪需要配制：PriboLab公司Pribofast  KRC 柱后光化学衍生器，含有1ml反应池，纳米灯管254nm

关于AFT色谱柱：

关于PriboLab & 北京泰乐祺科技有限公司  

作为面向提供霉菌毒素检测技术解决方案的主要服务商之一，PriboLab凭借强大的研发团队和霉菌毒素检测技术的研究，为农业生产、食品加工与粮食、饲料工业等行业提供专业的真菌毒素检测技术产品与技术服务。北京泰乐祺科技作为 PriboLab在中国的合作伙伴，积极为国内客户提供的霉菌毒素检测技术与产品服务，为国内客户提供适宜的霉菌毒素检测方案，帮助客户建立的霉菌毒素项目检测分析平台。